還在用紫外吸收法定量蛋白質(zhì)？更高靈敏度的蛋白質(zhì)定量神器來襲 | 技術(shù)頭條
還在使用紫外吸收法進(jìn)行蛋白質(zhì)定量分析？告別低靈敏度、對(duì)樣品純度要求高（如體系中殘留的核酸干擾吸光度）的蛋白質(zhì)定量！
現(xiàn)在，僅需***臺(tái) Duetta? 熒光及吸收光譜儀，操作簡單、超低檢測限、杜絕殘留核酸的干擾，快速實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)/抗體的定量分析。
圖 1 轉(zhuǎn)鐵蛋白三維結(jié)構(gòu)
使用10 mM PBS，配制濃度范圍為0.75 μg/mL 至 50 μg/mL 的轉(zhuǎn)鐵蛋白溶液，用于熒光和吸收光譜測量。使用相同的緩沖液（不含蛋白）作為空白對(duì)照。
*實(shí)驗(yàn)使用的激發(fā)波長為250 nm，發(fā)射波長為265 nm到 550 nm，CCD 積分時(shí)間為2秒，狹縫為10 nm。本實(shí)驗(yàn)使用臺(tái)式分光光度計(jì)作為對(duì)比。
01. 吸收光譜模式 圖 2 兩種儀器的吸收光譜對(duì)比 02. 熒光光譜模式 使用 Duetta? 熒光光譜模式檢測轉(zhuǎn)鐵蛋白溶液的熒光光譜，如圖3所示。對(duì)***低濃度的放大結(jié)果顯示，檢測限約為0.75 μg/mL。 圖 3 轉(zhuǎn)鐵蛋白在0.75 μg/mL- 50 μg/mL 的熒光發(fā)射光譜 在0.75 μg/mL 至50 μg/mL 的濃度范圍內(nèi)， Duetta? 在***大發(fā)射波長下的熒光強(qiáng)度、分光光度計(jì)測得的吸光度、轉(zhuǎn)鐵蛋白濃度的關(guān)系如圖4所示。圖中顯示 Duetta? 對(duì)轉(zhuǎn)鐵蛋白的檢測限約為0.75 μg/mL，熒光強(qiáng)度與濃度呈正相關(guān)。對(duì)比使用臺(tái)式分光光度計(jì)檢測到的***低濃度為25 μg/mL，Duetta? 的靈敏度高33倍。 這證實(shí)了 Duetta? 在檢測蛋白質(zhì)時(shí)具有遠(yuǎn)高于傳統(tǒng)紫外吸收法的靈敏度，因此非常適合用于低濃度蛋白質(zhì)的定量分析。 圖 4 使用 Duetta? 和分光光度計(jì)檢測轉(zhuǎn)鐵蛋白濃度的比較 本文使用 HORIBA Duetta? 熒光及吸收光譜儀進(jìn)行熒光光譜和吸收光譜的測量。Duetta? 可以同步檢測熒光光譜與吸收光譜，是蛋白質(zhì)定性、定量、聚集分析利器。
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